Táirgí
Trealamh braite Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR do 2019-nCoV
Úsáid ionchais
Úsáidtear an trealamh seo le haghaidh braite cáilíochtúil an choróinvíris nua (2019-nCoV) ag baint úsáide as táithíní scornach, táithíní nasopharyngeal, leacht lavage bronchoalveolar, sputum.Is le haghaidh tagartha cliniciúil amháin atá toradh braite an táirge seo, agus níor cheart é a úsáid mar an t-aon duine. fianaise le haghaidh diagnóis chliniciúil agus cóireáil. Moltar anailís chuimsitheach ar an riocht i gcomhcheangal le léirithe cliniciúla an othair agus tástálacha saotharlainne eile.
Prionsabal iniúchta
Tá an trealamh bunaithe ar theicneolaíocht RT-PCR aonchéime.Go deimhin, roghnaíodh na géinte nua 2019 coronavirus (2019-nCoV) ORF1ab agus N mar na réigiúin sprice aimpliúcháin.Tá primers sonracha agus tóireadóirí fluaraiseacha (tá tóireadóirí géine N lipéadaithe le FAM agus tá tóireadóirí ORF1ab lipéadaithe le HEX) deartha chun RNA de chineál nua coronavirus 2019 a bhrath i samplaí.Áiríonn an trealamh freisin córas braite rialaithe inmheánaigh ingenous ( taiscéalaí géine rialaithe inmheánaigh lipéadaithe le CY5) chun monatóireacht a dhéanamh ar phróiseas bailithe samplaí, aimpliú RNA agus PCR, rud a laghdóidh torthaí bréagacha diúltacha.
Príomhchodanna
| Comhpháirteanna | Toirt（48T/Kit） |
| Réiteach imoibrithe RT-PCR | 96µl |
| nCOV primer TaqMan probemixture (ORF1ab, N Gene, RnaseP Gene) | 864µl |
| Rialú diúltach | 1500µl |
| nCOV contro dearfach （l ORF1ab N Gene） | 1500µl |
Imoibrithe dílse: imoibrithe eastósctha nó íonúcháin RNA.Rialú diúltach/dearfach: Is é an rialú dearfach ná RNA ina bhfuil an spriocbhlúire, agus is uisce saor ó aigéad núicléach an rialú diúltach.Le linn úsáide, ba cheart dóibh páirt a ghlacadh san eastóscadh agus ba cheart iad a mheas mar ionfhabhtaíoch.Ba cheart iad a láimhseáil agus a dhiúscairt de réir na rialachán ábhartha.
Is í an ghéin thagartha inmheánach an ghéin RnaseP daonna.
Coinníollacha stórála agus dáta éaga
-20 ± 5 ℃, a sheachaint reo arís agus arís eile agus leá níos mó ná 5 huaire, bailí ar feadh 6 mhí.
Ionstraim is infheidhme
Le FAM / HEX / CY5 agus ionstraim PCR fluaraiseacha il-chainéil eile.
Riachtanais eiseamail
1. Cineálacha eiseamail is infheidhme: táithíní scornach, táithíní nasopharyngeal, leacht lavage bronchoalveolar, sputum.
Bailiúchán 2.specimen (teicníc aiseipteach)
Swab pharyngeal: Glan na tonsils agus an balla pharyngeal posterior le dhá swab ag an am céanna, agus ansin an ceann swab a thumadh i bpromhadán ina bhfuil an tuaslagán samplála
Sputum: Tar éis casacht dhomhain a bheith ag an othar, bailigh an sputum coughed i bhfeadán tástála caipín scriú ina bhfuil an réiteach samplála;Leacht lavage bronchoalveolar:Sampláil ag gairmithe leighis.3.Storage agus iompar samplaí
Ba cheart eiseamail le haghaidh aonrú víreas agus tástáil RNA a thástáil chomh luath agus is féidir.Is féidir eiseamail is féidir a bhrath laistigh de 24 uair an chloig a stóráil ag 4 ℃;iad siúd nach féidir a bhrath laistigh de 24
ba chóir uaireanta a stóráil ag -70 ℃ nó thíos (mura bhfuil aon riocht stórála de -70 ℃, ba chóir go mbeadh siad
stóráilte go sealadach ag -20 ℃ cuisneoir).Ba cheart go seachnódh eiseamail reo agus leá arís agus arís eile le linn iompair.Ba cheart eiseamail a sheoladh chuig an tsaotharlann a luaithe is féidir tar éis iad a bhailiú.Más gá samplaí a iompar thar achair fhada, moltar stóráil tirim oighir.
Modhanna Tástála
1 Próiseáil shamplach agus eastóscadh RNA (limistéar próiseála samplach)
Moltar 200μl de shampla leachtach a ghlacadh le haghaidh eastóscadh RNA.Le haghaidh céimeanna eastósctha gaolmhara, féach ar threoracha feisteáin eastósctha RNA tráchtála.An diúltach agus diúltach araon
bhí baint ag rialuithe sa trealamh seo leis an eastóscadh.
Ullmhúchán imoibrí 2 PCR (limistéar ullmhúcháin imoibrí)
2.1 Bain na comhábhair go léir as an trealamh agus leá agus measc ag teocht an tseomra.Lártheifneoir ag 8,000 rpm ar feadh cúpla soicind roimh úsáid;ríomh méid riachtanach na n-imoibrithe, agus ullmhaítear an córas imoibrithe mar a thaispeántar sa tábla seo a leanas:
| Comhpháirteanna | N riar (córas 25µl) |
| nCOV primer TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| Réiteach imoibrithe RT-PCR | 2 µl × N |
| *N = líon na samplaí a tástáladh + 1 (rialú diúltach) + 1 (nCOVrialú dearfach) | |
2.2 Tar éis na comhpháirteanna a mheascadh go críochnúil, lártheifneoir ar feadh tamaill ghearr chun ligean don leacht ar fad ar bhalla an fheadáin titim go bun an fheadáin, agus ansin an córas aimplithe 20 µl a chur isteach sa fheadán PCR.
3 Sampláil (limistéar ullmhaithe eiseamail)
Cuir 5μl de na rialuithe diúltacha agus dearfacha leis tar éis eastóscadh.Cuirtear RNA an tsampla atá le tástáil leis an bhfeadán imoibrithe PCR.
Cuir caipín ar an bhfeadán go docht agus lártheifneoir ag 8,000 rpm ar feadh cúpla soicind sula n-aistrítear go dtí an limistéar braite aimpliúcháin é.
Aimpliú 4 PCR (limistéar braite aimplithe)
4.1 Cuir an feadán imoibrithe i gcill samplach na hionstraime, agus socraigh na paraiméadair mar seo a leanas:
| stáitse | Rothaíocht uimhir | Teocht(°C) | Am | bhailiúsuíomh |
| Droim ar aistrascríobh | 1 | 42 | 10 nóiméad | - |
| Réamh-dínádúrún | 1 | 95 | 1 nóiméad | - |
| Rothaíocht | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | bailiú sonraí |
Roghnú cainéal braite ionstraime: Roghnaigh an cainéal FAM, HEX, CY5 don chomhartha fluaraiseachta.Maidir le fluaraiseacha tagartha NÍL, ná roghnaigh ROX le do thoil.
5 Anailís ar thorthaí (Féach, le do thoil, na treoracha turgnamhacha a bhaineann le gach uirlis le haghaidh socrú)
Tar éis an imoibrithe, sábháil na torthaí.Tar éis anailíse, coigeartaigh an luach tosaigh, an luach deiridh, agus luach tairsí na bunlíne de réir na híomhá (is féidir leis an úsáideoir a choigeartú de réir an staid iarbhír, is féidir an luach tosaigh a shocrú go 3 ~ 15, is féidir an luach deiridh a shocrú go dtí 5 ~ 20, coigeartú) sa ghraf logartamach Ag tairseach na fuinneoige, tá an líne tairsí sa chéim logartamach, agus tá cuar aimplithe an rialaithe diúltach ina líne dhíreach nó faoi bhun na líne tairsí).
6 Rialú Cainníochta （Tá rialú nós imeachta san áireamh sa tástáil） Rialú diúltach: Níl aon chuar aimpliúcháin soiléir do chainéil braite FAM, HEX, CY5n
Rialú dearfach COV: cuar aimpliúcháin soiléir de chainéil braite FAM agus HEX, Ct value≤32, ach gan aon chuar aimpliúcháin de chainéil CY5;
Ní mór na ceanglais thuas a chomhlíonadh go comhuaineach sa turgnamh céanna;ar shlí eile, tá an turgnamh neamhbhailí agus ní mór é a athdhéanamh.
7 Torthaí a chinneadh.
7.1 Mura bhfuil cuar aimpliúcháin nó luach Ct> 40 i gcainéal FAM agus HEX an tsampla tástála, agus go bhfuil cuar aimpliúcháin sa chainéal CY5, is féidir a mheas nach bhfuil aon choróinvíreas nua 2019 ann (2019-nCoV) RNA sa sampla;
.2 Má tá cuair aimpliúcháin soiléire ag an sampla tástála sna cainéil FAM agus HEX, agus gurb é ≤40 an luach Ct, is féidir a mheas go bhfuil an sampla dearfach don choróinvíreas nua 2019 (2019-nCoV).
7.3 Mura bhfuil cuar aimpliúcháin soiléir ag an sampla tástála ach i gcainéal amháin FAM nó HEX, agus is é an luach Ct ≤40, agus níl aon chuar aimpliúcháin sa chainéal eile, is gá na torthaí a aththástáil.Má tá torthaí na hathtástála comhsheasmhach, is féidir a mheas go bhfuil an sampla dearfach don sampla nua
coróinvíreas 2019 (2019-nCoV).Más rud é go bhfuil toradh na hathtástála diúltach, is féidir a mheas go bhfuil an sampla diúltach do choróinvíreas nua 2019 (2019-nCoV).
Luach breithiúnas dearfach
Úsáidtear modh cuar ROC chun luach tagartha CT an fheiste a chinneadh agus is é 40 an luach tagartha rialaithe inmheánaigh.
Léiriú ar thorthaí tástála
1. Ba chóir gach turgnamh a thástáil le haghaidh rialuithe diúltacha agus dearfacha.Ní féidir torthaí tástála a chinneadh ach amháin nuair a chomhlíonann na rialuithe ceanglais rialaithe cáilíochta
2.Nuair a bhíonn na bealaí braite FAM agus HEX dearfach, féadfaidh an toradh ón gcainéal CY5 (cainéal rialaithe inmheánaigh) a bheith diúltach mar gheall ar iomaíocht chórais.
3. Nuair a bhíonn an toradh rialaithe inmheánaigh diúltach, má tá bealaí braite FAM agus HEX an fheadáin tástála diúltach freisin, , ciallaíonn sé go bhfuil an córas faoi mhíchumas nó go bhfuil an oibríocht mícheart, tá an tástáil neamhbhailí.Dá bhrí sin, is gá na samplaí a aththástáil.
