Táirgí
Trealamh braite Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR le haghaidh 2019-nCoV
Úsáid ionchais
Úsáidtear an trealamh seo chun an coróinvíreas nua (2019-nCoV) a bhrath go cáilíochtúil ag baint úsáide as swabanna scornach, swabanna nasopharyngeal, sreabhán lavage bronchoalveolar, agus sputum. Chun críocha cliniciúla amháin atá toradh braite an táirge seo, agus níor cheart é a úsáid mar an t-aon fhianaise le haghaidh diagnóis agus cóireála cliniciúil. Moltar anailís chuimsitheach ar an riocht i gcomhar le léirithe cliniciúla an othair agus tástálacha saotharlainne eile.
Prionsabal cigireachta
Tá an trealamh bunaithe ar theicneolaíocht RT-PCR aonchéime. Go deimhin, roghnaíodh géinte ORF1ab agus N an choróinvíris nua 2019 (2019-nCoV) mar réigiúin sprice aimplithe. Tá tosaitheoirí sonracha agus tóireadóirí fluaraiseacha (lipéadaítear tóireadóirí géine N le FAM agus lipéadaítear tóireadóirí ORF1ab le HEX) deartha chun RNA coróinvíris den chineál nua 2019 a bhrath i samplaí. Cuimsíonn an trealamh córas braite rialaithe inmheánaigh intíre (tóireadóir géine rialaithe inmheánaigh lipéadaithe le CY5) chun monatóireacht a dhéanamh ar an bpróiseas bailithe samplaí, RNA agus aimplithe PCR, rud a laghdaíonn torthaí diúltacha bréagacha.
Príomhchodanna
| Comhpháirteanna | Imleabhar(48T/Trealamh） |
| Tuaslagán imoibrithe RT-PCR | 96µl |
| nCOV primer TaqMan probemixture (ORF1ab, N Gene, RnaseP Gene) | 864µl |
| Rialú diúltach | 1500µl |
| nCOV contro dearfach （l ORF1ab N Gene） | 1500µl |
Imoibritheoirí féin: eastóscadh RNA nó imoibrithe íonúcháin. Rialú diúltach/dearfach: Is é an rialú dearfach RNA ina bhfuil an blúire sprice, agus is uisce saor ó aigéad núicléasach an rialú diúltach. Le linn úsáide, ba chóir dóibh páirt a ghlacadh san eastóscadh agus ba chóir iad a mheas mar thocsaineach. Ba chóir iad a láimhseáil agus a dhiúscairt de réir na rialachán ábhartha.
Is é an géin tagartha inmheánach an géin RnaseP daonna.
Coinníollacha stórála agus dáta éaga
-20 ± 5 ℃, seachain reo agus leá arís agus arís eile níos mó ná 5 huaire, bailí ar feadh 6 mhí.
Ionstraim is infheidhme
Le FAM / HEX / CY5 agus ionstraim PCR fluaraiseach ilchainéil eile.
Riachtanais eiseamláir
1. Cineálacha eiseamal infheidhme: swabanna scornach, swabanna nasopharyngeal, sreabhán lavage bronchoalveolar, sputum.
2. Bailiú eiseamal (teicníc aiseipteach)
Súbán fairingealach: Glan na tonsail agus balla cúil na fairinge le dhá shúbán ag an am céanna, ansin tum ceann an shúbáin i bhfeadán tástála ina bhfuil an tuaslagán samplála.
Sputum: Tar éis casacht dhomhain a bheith ag an othar, bailigh an sputum casachtach i bhfeadán tástála le caipín scriú ina bhfuil an tuaslagán samplála; sreabhán lavage broncoalveolar: Sampláil ag gairmithe leighis. 3. Stóráil agus iompar samplaí
Ba chóir eiseamail le haghaidh aonrú víris agus tástála RNA a thástáil a luaithe is féidir. Is féidir eiseamail is féidir a bhrath laistigh de 24 uair an chloig a stóráil ag 4℃; is féidir eiseamail nach féidir a bhrath laistigh de 24…
ba chóir uaireanta a stóráil ag -70℃ nó faoina bhun (mura bhfuil aon riocht stórála de -70℃ ann, ba chóir iad a
stóráilte go sealadach ag cuisneoir -20℃). Ba chóir eiseamail a sheachaint ó reo agus leá arís agus arís eile le linn iompair. Ba chóir eiseamail a sheoladh chuig an tsaotharlann a luaithe is féidir tar éis iad a bhailiú. Más gá samplaí a iompar thar achair fhada, moltar oighear tirim a stóráil.
Modhanna Tástála
1 Próiseáil samplach agus eastóscadh RNA (limistéar próiseála samplach)
Moltar 200μl de shampla leachtach a thógáil le haghaidh eastóscadh RNA. Le haghaidh céimeanna eastósctha gaolmhara, féach ar threoracha na dtrealamh eastósctha RNA tráchtála. An dá cheann diúltach agus diúltach
Bhí rialuithe sa trealamh seo páirteach san eastóscadh.
2 Ullmhú imoibrí PCR (limistéar ullmhúcháin imoibrí)
2.1 Bain na comhpháirteanna go léir as an trealamh agus díreoigh agus measc ag teocht an tseomra. Lártheifneoirigh ag 8,000 rpm ar feadh cúpla soicind roimh úsáid; ríomh an méid imoibrithe atá ag teastáil, agus ullmhaítear an córas imoibrithe mar a thaispeántar sa tábla seo a leanas:
| Comhpháirteanna | N riar (córas 25µl) |
| nCOV primer TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| Tuaslagán imoibrithe RT-PCR | 2 µl × N |
| *N = líon na samplaí a tástáladh + 1 (rialú diúltach) + 1 (nCOVrialú dearfach) | |
2.2 Tar éis na comhpháirteanna a mheascadh go críochnúil, déan lártheifneoiriú ar feadh tamaill ghairid chun ligean don leacht go léir ar bhalla an fheadáin titim go bun an fheadáin, agus ansin déan cuid den chóras aimpliúcháin 20 µl a aliquot isteach sa fheadán PCR.
3 Sampláil (limistéar ullmhúcháin eiseamal)
Cuir 5μl de na rialuithe diúltacha agus dearfacha leis tar éis an eastósctha. Cuirtear RNA an tsampla atá le tástáil leis an bhfeadán imoibrithe PCR.
Cuir caipín daingean ar an bhfeadán agus déan lártheifneoiriú ag 8,000 rpm ar feadh cúpla soicind sula n-aistrítear chuig an limistéar braite aimpliúcháin é.
4 Aimpliú PCR (limistéar braite aimplithe)
4.1 Cuir an feadán imoibrithe i gcill shamplach an ionstraime, agus socraigh na paraiméadair mar seo a leanas:
| stáitse | Timthriall uimhir | Teocht(°C) | Am | bailiúchánsuíomh |
| Droim ar aistrascríobh | 1 | 42 | 10 nóiméad | - |
| Réamh-dhínádúrún | 1 | 95 | 1 nóiméad | - |
| Timthriall | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30idí | bailiú sonraí |
Roghnú cainéal braite ionstraime: Roghnaigh cainéal FAM, HEX, CY5 don chomhartha fluaraiseachta. I gcás tagartha fluaraiseachta NONE, ná roghnaigh ROX le do thoil.
5 Anailís ar thorthaí (Féach treoracha turgnamhacha gach ionstraime le haghaidh socruithe)
Tar éis an imoibrithe, sábháil na torthaí. Tar éis anailíse, coigeartaigh an luach tosaigh, an luach deiridh, agus luach tairsí an bhunlíne de réir na híomhá (is féidir leis an úsáideoir coigeartú a dhéanamh de réir an cháis iarbhír, is féidir an luach tosaigh a shocrú go 3~15, is féidir an luach deiridh a shocrú go 5~20, coigeartú) sa ghraf logartamach. Ag tairseach na fuinneoige, tá an líne tairsí sa chéim logartamach, agus tá cuar aimplithe an rialaithe dhiúltaigh ina líne dhíreach nó faoi bhun na líne tairsí).
6 Rialú cáilíochta (Tá rialú nós imeachta san áireamh sa tástáil) Rialú diúltach: Gan aon chuar aimpliúcháin soiléir do chainéil bhrath FAM, HEX, CY5
Rialú dearfach COV: cuar aimpliúcháin soiléir de chainéil bhrath FAM agus HEX, luach Ct≤32, ach gan aon chuar aimpliúcháin de chainéal CY5;
Ní mór na ceanglais thuas a chomhlíonadh ag an am céanna san turgnamh céanna; nó eile, beidh an turgnamh neamhbhailí agus caithfear é a athdhéanamh.
7 Cinneadh na dtorthaí.
7.1 Mura bhfuil cuar aimpliúcháin nó luach Ct > 40 i gcainéal FAM agus HEX an tsampla tástála, agus má tá cuar aimpliúcháin sa chainéal CY5, is féidir a mheas nach bhfuil aon RNA coróinvíris nua 2019 (2019-nCoV) sa sampla;
.2 Má tá cuar aimpliúcháin soiléire ag an sampla tástála sna bealaí FAM agus HEX, agus má tá an luach Ct ≤40, is féidir a mheas go bhfuil an sampla dearfach don choróinvíreas nua 2019 (2019-nCoV).
7.3 Má tá cuar aimpliúcháin soiléir ag an sampla tástála i gcainéal amháin de FAM nó HEX, agus má tá an luach Ct ≤40, agus mura bhfuil aon chuar aimpliúcháin sa chainéal eile, ní mór na torthaí a aththástáil. Má tá na torthaí aththástála comhsheasmhach, is féidir a mheas go bhfuil an sampla dearfach don tástáil nua.
coróinvíreas 2019 (2019-nCoV). Má bhíonn toradh an aththástála diúltach, is féidir a mheas go bhfuil an sampla diúltach don choróinvíreas nua 2019 (2019-nCoV).
Luach breithiúnais dhearfach
Úsáidtear an modh cuar ROC chun luach tagartha CT an trealaimh a chinneadh agus is é 40 an luach tagartha rialaithe inmheánaigh.
Léirmhíniú ar thorthaí tástála
1. Ba chóir gach turgnamh a thástáil le haghaidh rialuithe diúltacha agus dearfacha. Ní féidir torthaí tástála a chinneadh ach amháin nuair a chomhlíonann rialuithe ceanglais rialaithe cáilíochta.
2. Nuair a bhíonn na bealaí braite FAM agus HEX dearfach, d’fhéadfadh an toradh ón gcainéal CY5 (cainéal rialaithe inmheánach) a bheith diúltach mar gheall ar iomaíocht chórais.
3. Nuair a bhíonn toradh an rialaithe inmheánaigh diúltach, má bhíonn bealaí braite FAM agus HEX an fheadáin tástála diúltach freisin, ciallaíonn sé sin go bhfuil an córas díchumasaithe nó go bhfuil an oibríocht mícheart, tá an tástáil neamhbhailí. Dá bhrí sin, ní mór na samplaí a aththástáil.
